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山东市监局发布《牡蛎疱疹病毒І型检测技术规范》

2019-07-29 12:09:21  来源:管理局 浏览量:488次
【导读】牡蛎疱疹病毒І型属于软体动物疱疹病毒科、牡蛎疱疹病毒属,是一种双链DNA病毒,在世界范围内广泛流行。

    本标准规定了牡蛎疱疹病毒І型(Ostreid herpesvirus-1,OsHV-1)的巢式PCR检测方法,适用于对贝类样品进行疱疹病毒І型带毒情况的定性检测,以进行牡蛎疱疹病毒І型的流行病学调查、诊断、检疫和监测。

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  试剂

  无水乙醇、TE缓冲液、抽提缓冲液、蛋白酶K、乙酸铵、Tirs饱和酚、Taq DNA聚合酶、MgCl2、溴化乙锭(EB)、PCR检测阳性对照、PCR检测阴性对照、PCR检测空白对照以灭菌双蒸水作模板

  仪器

  离心机、PCR仪、电泳仪、水平电泳槽、凝胶成像系统、紫外仪、多功能振荡器、水浴锅或金属浴、-20 ℃普通冰箱、–80 ℃超低温冰箱、加热设备、微量移液器:量程0。5μL~1 000μL。

  第一步反应体系及反应扩增程序

  PCR反应体系如表1所示(25 μL反应体系)。阳性样品:牡蛎疱疹病毒І型DNA;阴性样品:健康双壳贝类组织DNA;空白对照:超纯水;检测样品:待检测样品组织DNA。PCR反应条件为:94 ℃预变性5 min;94 ℃变性30 sec、46 ℃退火30 sec、72 ℃延伸1 min,32个循环;72 ℃延伸10 min,4 ℃保温。

  第二步反应体系及反应扩增程序

  取6.2.1中PCR扩增产物稀释100倍作为模板,以内引物C3、C2为引物进行PCR扩增,反应体系成分同第一步扩增反应。PCR反应条件为:94 ℃预变性5 min;94 ℃变性30 sec、48 ℃退火30 sec、72 ℃延伸35 sec,32个循环;72 ℃延伸10 min,4 ℃保温。

  结果表述

  阳性结果报告为该贝类样本中存在牡蛎疱疹病毒І型DNA。阴性结果报告为该贝类样本中不存在牡蛎疱疹病毒І型DNA。


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2019-07-29 12:09:21
标签:PCR仪 , 离心机 , 凝胶成像系统 , 牡蛎疱疹病毒
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